何謂常規(guī)反相色譜柱？

  那些在硅膠或雜化基質顆粒上鍵合了如C18、C8、C4或苯基等鍵合相的色譜填料所裝填的色譜柱，按反相色譜條件進行操作和分離。C18是反相液相色譜柱中使用較為廣泛的一款色譜柱，使用維護參考如下。

常規(guī)反相分析色譜柱新色譜柱開啟和安裝的推薦步驟：

1. 使用新鮮潔凈的水與乙腈。沖洗系統(tǒng)，確保系統(tǒng)干凈，不含任何緩沖鹽和污染物。

2. 取用色譜柱時避免磕碰掉落。

3. 將色譜柱入口端連接到系統(tǒng)上，柱出口端先不要連接，色譜柱身上有箭頭標明正確流向。

4. 在0.1 mL/min流速條件下用純乙腈潤洗色譜柱，然后在2分鐘內將流速升至0.5 mL/min。

5. 當溶劑均勻的從柱出口端流出，停流速，將色譜柱出口端接到系統(tǒng)檢測器上(這樣可以避免氣泡進入檢測系統(tǒng)，并且可快速達到基線平衡)。

6. 重啟流速，按照步驟4的方法逐漸提高流速，至常規(guī)分析時所使用的流速。

7. 參考柱效測試報告中的方法，使用該流動相條件平衡色譜柱，通常需要使用5-10倍柱體積的流動相，直至壓力與基線穩(wěn)定。

8. 測試柱效。如果沒有柱效測試報告中的分析物，請聯(lián)系沃特世化學消耗品部門尋求支持，使用合適的濃度與進樣量。柱效結果略低于

柱效測試報告屬正常情況。如結果明顯偏低、峰形拖尾，提示色譜柱和/或所使用的液相系統(tǒng)處于非理想狀態(tài)，需要進行故障排查。

  當使用2.1 mm內徑色譜柱時，建議優(yōu)化系統(tǒng)以減少譜帶展寬，包括：使用檢測器微量流通池，減少進樣器loop環(huán)體積，使用較小內徑(如0.005’’或0.12 mm)的系統(tǒng)管路。并確保管路與色譜柱連接恰當、無死體積。

  當使用小顆粒填料(如2.5 μm)短柱進行高效快速分離時，需要考慮以下因素：

●確保管路與色譜柱連接恰當、無死體積，盡量優(yōu)化系統(tǒng)減少譜帶展寬；

●提高采樣頻率至10點/秒以上；

●較小粒徑的色譜柱產生的柱壓較高，而較小粒徑要達到理想的色譜效率所需的線速度較高，請根據(jù)所用LC系統(tǒng)的實際情況調節(jié)流速；

●可使用較高的柱溫來補償小顆粒造成的壓力升高，例如40℃。使用雜化顆粒反相色譜柱時，可使用45℃或更高。